学术论文

      HIV-1 Vif蛋白的体内表达及其生物学功能

      In Vivo Expression and Biological Function of HIV-1 Vif Protein

      摘要:
      目的 分别构建带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因真核表达载体,在体内表达融合蛋白,并检测其生物学功能.方法 PCR扩增带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因,克隆至真核表达载体VRl012上.将抗病毒因子APOBEC3G(A3G)分别与空载体VR1012、HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,检测Vif-mbp和Vif-6His的表达,并进行A3G体内降解试验.将A3G和/或可产生病毒的质粒HXB2Neo △ Aif分别与HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,通过A3G包装进病毒和Magi细胞感染试验,进一步检测HIV-1 Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白的生物学功能.结果 重组表达质粒Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012经双酶切鉴定证明构建正确.转染293T细胞48 h后,Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白均有表达,但表达的Vff-mbp有不同程度的降解.Vif-6His可降解A3G,使其表达量下降至10%左右,而Vif-mbp几乎不能降解A3G.Vif-6His可阻止A3G包装进病毒颗粒中,而Vif-mbp无此功能.Vif-mbp可使HXB2Neo △ Vif病毒感染能力恢复至15%,而Vif-6His可使其恢复至86%.结论 已成功构建了带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因真核表达载体,表达的Vif-mbp融合蛋白影响了Vif的生物学功能,但Vif-6His融合蛋白不影响Vif的生物学功能.
      Author: ZHANG Wen-yan KONG Wei YU Xiang-hui
      作者单位: 吉林大学生命科学学院,长春,130012
      刊 名: 中国生物制品学杂志 ISTIC
      年,卷(期): 2008, 21(9)
      分类号: R373 QTS6
      机标分类号: R65 S8
      在线出版日期: 2008年11月18日
      基金项目: 国家自然科学基金,吉林省科技发展计划杰出青年资助项目,教育部跨世纪优秀人才培养计划