学术论文

      天蚕素A-蛙皮素杂合肽突变体的构建、表达及其抗菌活性

      Construction and Expression of Cecropin A (1-8)-Magainin (1-12)Hybrid Peptide Mutant and Antibacterial Activity of Expressed Product

      摘要:
      目的 构建天蚕素A(1~8)-蛙皮素(1~12)杂合基因抗菌肽(CA-MA杂合肽)突变体,在大肠杆菌中融合表达,并进行抗菌活性检测.方法 采用PCR体外定点突变技术,设计1对方向相反的引物,其中1个引物引入突变点,应用高保真的Polybest DNA多聚酶进行重组表达质粒pGEX-4T-1-CA-MA的PCR扩增,使CA-MA杂合肽第16位密码子由AGT突变为TGG.将扩增片段自身连接,构建CA-MA杂合肽突变重组表达质粒pGEX-4T-1-W16-CA-MA,转化E. coli BL21,IPTG诱导表达突变体蛋白W16-CA-MA,并对表达产物进行纯化.分离GST融合蛋白后,进行抗菌活性检测.结果 重组突变表达质粒DNA测序结果表明,在预期位点发生了突变;突变蛋白在大肠杆菌中的表达量约占茵体总蛋白的18%;纯化后蛋白纯度可达75%以上,并具有一定的抗菌活性.结论 已成功获得了具有抗菌活性的杂合肽突变体W16-CA-MA.
      作者单位: 兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学研究所,兰州,730000
      刊 名: 中国生物制品学杂志 ISTIC
      年,卷(期): 2008, 21(9)
      分类号: Q784
      机标分类号: R97 S88
      在线出版日期: 2008年11月18日
      基金项目: 国家高技术研究发展计划(863计划)