学术论文

      Cyclin A-Cdk2对B细胞成熟因子的体外磷酸化作用

      In Vitro Phosphorylation of B Cell Maturation Factor with Cyclin A-Cdk2

      摘要:
      目的 原核表达并纯化仅含BH3结构域的细胞凋亡调控蛋白BMF,并进行CyclinA-Cdk2特异性底物的体外磷酸化检测.方法 从HeLa细胞中扩增人源BMF基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B凝胶柱亲和层析纯化.以纯化的融合蛋白GST-BMF作为底物,免疫共沉淀得到的Cyclin A-Cdk2作为酶源,并以Cdk2的已知底物Histone H1作为阳性对照,进行体外磷酸化试验.结果 BMF基因的原核表达载体构建正确,表达的融合蛋白GST-BMF约占菌体总蛋白的40%,纯化后纯度约为90%.在体外磷酸化试验中,未出现与目的 蛋白GST-BMF相对分子质量相近的放射自显影带.结论 BMF蛋白在无细胞体系中不能被Cyclin A-Cdk2磷酸化.
      作者: 李清 [1] 何侃 [2] 高畅 [2] 李晶华 [2] 金英花 [2]
      作者单位: 吉林大学生命科学学院,长春,130012;大连大学生物工程学院,大连,116622 吉林大学生命科学学院,长春,130012
      刊 名: 中国生物制品学杂志 ISTIC
      年,卷(期): 2008, 21(9)
      分类号: Q291
      机标分类号: R28 R39
      在线出版日期: 2008年11月18日