学术论文

      犬常见传染病诊断基因芯片的研究与应用

      Establishment of diagnostic assay for canine common syndrome with microarray techniques

      摘要:
      根据PCR技术扩增出犬腺病毒(CAV)ORF1(p-Ⅷ)基因、犬细小病毒(CPV)VP2基因、鸡血红蛋白的珠蛋白基因(GLOBc)各保守基因片段;采用RT-PCR扩增出犬冠状病毒(CCV)纤突蛋白(S)基因、犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因、犬副流感病毒(CPIV)核衣壳结构蛋白(NP)基因、狂犬病病毒(RV)核蛋白(N)基因的各一段保守序列,克隆获取质粒.通过微量点样技术将这些质粒作为探针点在硝酸纤维素膜上,产生二维DNA探针阵列,制作成诊断基因芯片.对360份待检样品匀浆后提取核酸作为模板,扩增相应保守基因片段.通过生物素标记PCR(RT-PCR)技术,将所获得的扩增产物与诊断基因芯片进行特异性的逆向点杂交,然后用扫描仪对芯片进行扫描分析、判断.结果表明,此方法比病毒分离、HI、PCR或RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,平均检出率要高20%以上,并可同时对犬多种疫病进行快速诊断.
      作者: 张伟 [1] 吴时友 [2] 尹燕博 [2] 牛钟相 [3]
      Author: ZHANG Wei [1] WU Shi-you [2] YIN Yan-bo [2] NIU Zhong-xiang [3]
      作者单位: 山东省农业科学院畜牧所,山东,济南,250100;山东农业大学动物科技学院,山东,泰安,271018 山东澳兰生物工程研究院,山东,青岛,266101 山东农业大学动物科技学院,山东,泰安,271018
      刊 名: 中国兽医学报 ISTICPKU
      年,卷(期): 2007, 27(4)
      分类号: S829.2
      机标分类号: R5 S85
      在线出版日期: 2007年8月13日
      基金项目: 山东省青岛市科技攻关项目