小鼠Klf4基因的克隆及原核表達分析

Cloning and Prokaryotic Expression of Krüppel-Like Factor 4 in Mouse

doi：

摘要：

目的 克隆Klf4基因并對其重組蛋白進行原核表達及分析.方法 提取胎鼠皮膚mRNA后反轉錄為cDNA序列,用一對兩端引入特定酶切位點引物,從該cDNA中擴增出Klf4基因編碼區序列,將其克隆到pEasy-T3載體上.對質粒雙酶切并回收其中Klf4基因片段后,克隆入pET-52b(+)載體后轉化Origmai B(DE3)型大腸桿菌,用IPTG誘導表達,最后采用SDS-PAGE對重組蛋白進行鑒定及分析.結果 對所克隆的Klf4 mRNA蛋白編碼區的DNA序列分析表明,klf4 CDS區包括終止密碼子在內為1452 bp,與參照序列對比僅有四處存在差異,不僅其同源性達到99.72%,且其氨基酸序列同源性為100%;在IPTG誘導下pET-52b(+)-Klf4重組質粒可表達與預期相符的約為57×103的蛋白質;經IPTG刺激后重組蛋白表達明顯上調,其中IPTG為0.4 mol/L時效果最佳.結論 從胎鼠皮膚中克隆的Klf4基因可在原核中表達.

作者：	王春生羅芳杜文敬安鐵洙
Author：	WANG Chun-sheng  LUO Fang  DU Wen-jing  AN Tei-zhu
作者單位：	東北林業大學生命科學學院,哈爾濱,150040
期 刊：	中國實驗動物學報   ISTIC
Journal：	ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
年，卷(期)：	2009, 17(2)
分類號：	R349.64
關鍵詞：	Klf4    克隆    原核表達
機標分類號：	R75 R65
機標關鍵詞：	小鼠    Klf4    基因片段    克隆    原核表達    表達分析    重組蛋白表達    IPTG誘導    序列同源性    DNA序列分析    終止密碼子    蛋白編碼區    編碼區序列    重組質粒    載體    序列對比    效果最佳    胎鼠    皮膚    酶切位點
基金項目：	國家自然科學基金，東北林業大學引進人才科研啟動基金