五指山小型豬外周血白細胞cDNA文庫的構建與鑒定

Construction and Identification of cDNA Library from the Peripheral Blood Leucocytes in Wuzhishan Miniature Pigs

doi：

摘要：

目的 運用SMART 技術,構建了五指山小型豬外周血白細胞cDNA文庫.方法 用RNAiso reagent(TaKaRa)處理新鮮血液,以總RNA抽提試劑盒(上海華舜) 制備總RNA.用Powerscript TM 反轉錄酶逆轉錄合成第一鏈cDNA,LD-PCR擴增獲得cDNA雙鏈,Sfi I酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分離后,500 bp以上的片段與pDNR-LIB載體連接,電轉化入E.coli.DH5α,建成原始文庫.然后,擴增文庫并隨機挑取單菌落,PCR鑒定重組子插入片段大小.結果 經鑒定,庫容量達到1.5×106克隆,原始文庫滴度為9.7×109 cfu/mL,擴增后的文庫滴度為6.4 ×1010 cfu/mL.重組率接近100%,插入片段大小為0.5～2 kb,平均長度約為1.1 kb.結論 構建的五指山小型豬外周血白細胞cDNA文庫符合建庫要求,可以用于全長cDNA 的篩選.為五指山小型豬新基因的獲得及結構和功能研究提供了可靠材料.

作者：	申明霞[1]劉濤[2]杜麗[2]王鳳陽[2]成鷹[2]李治深[2]滿初日嘎[2]林杰材[2]祁超[3]
Author：	SHEN Ming-xia[1]  LIU Tao[2]  DU Li[2]  WANG Feng-yang[2]  CHENG Ying[2]  LI Zhi-shen[2]  MAN CHU Ri ga[2]  LIN Jie-cai[2]  QI Chao[3]
作者單位：	海南大學農學院,海口市動物基因工程重點實驗室,海口,570228;華中師范大學生命科學學院,武漢,430079 海南大學農學院,海口市動物基因工程重點實驗室,海口,570228 華中師范大學生命科學學院,武漢,430079
期 刊：	中國實驗動物學報   ISTIC
Journal：	ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
年，卷(期)：	2009, 17(3)
分類號：	Q785
關鍵詞：	五指山小型豬    外周血白細胞    cDNA文庫    構建    鑒定
機標分類號：	R73 S82
機標關鍵詞：	五指山小型豬    外周血白細胞    cDNA文庫    構建與鑒定    Miniature Pigs    Peripheral Blood    cDNA Library    插入片段    擴增    轉錄合成    載體連接    平均長度    建庫要求    功能研究    反轉錄酶    滴度    PCR鑒定    柱分離    重組子    重組率
基金項目：	國家自然科學基金，海南省教育廳高等學校科研項目