GDF5基因真核表達載體的構建及其在恒河猴骨髓間充質干細胞中的表達

Construction of Eukaryotic Expression Vector of Growth/Differentiation Factor-5 Gene and Its Expression in Rhesus Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

doi：

摘要：

目的 克隆人軟骨組織生長分化因子5(GDF5)基因及構建GDF5基因真核表達載體,觀察其在恒河猴骨髓間充質干細胞(MSCs)中的表達情況.方法 采用反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)從人胎兒軟骨組織克隆hGDF5基因全長cDNA,插入pEGFP-C2載體,構建重組真核表達質粒pEGFP-C2-GDF5.重組質粒脂質體介導法轉染MSCs細胞,熒光顯微鏡觀察報告基因的表達,RT-PCR法檢測目的基因表達.結果 成功克隆人軟骨組織GDF5基因和構建GDF5真核表達質粒pEGFP-C2-GDF5,克隆在載體上的基因長度為1 505 bp,包含全部eDNA編碼序列1505 bp,測序顯示與Genbank上的序列一致.重組質粒轉染恒河猴MSCs細胞得到表達,綠色熒光蛋白在轉染24 h后開始表達,72 h達高峰,然后表達逐漸減弱.轉染后72 h可檢測到GDF5 mRNA表達.結論 人GDF5基因在恒河猴MSCs細胞的成功表達為應用恒河猴模型開展基于細胞的基因療法修復骨和軟骨損傷研究奠定了必要基礎.

作者：	王萬山[1]顧為望[1]樸仲賢[2]盧康榮[3]
Author：	WANG Wan-shan[1]  GU Wei-wang[1]  PIAO Zhong-xian[2]  LU Kang-rong[3]
作者單位：	南方醫科大學比較醫學研究所,廣州,510515 汕頭大學醫學院中心實驗室,汕頭,515041 南方醫科大學教育部和廣東省共建"重大疾病的轉錄組與蛋白質組學重點實驗室",廣州,510515
期 刊：	中國比較醫學雜志   ISTIC
Journal：	CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
年，卷(期)：	2008, 18(8)
分類號：	R-33
關鍵詞：	生長分化因子5    克隆    表達    間充質干細胞    恒河猴,胎兒
機標分類號：	R39 R65
機標關鍵詞：	基因真核表達載體    表達載體的構建    恒河猴    骨髓間充質干細胞    Eukaryotic Expression Vector    重組真核表達質粒    軟骨組織    質粒轉染    重組質粒    克隆人    聚合酶鏈式反應    脂質體介導法    生長分化因子    綠色熒光蛋白    顯微鏡觀察    組織克隆    胎兒軟骨    損傷研究    基因療法    基因長度
基金項目：	國家重點基礎研究發展計劃(973計劃)