MDR1 基因單靶點雙熒光素酶報告基因系統的建立

Establishment of Dual Luciferase Report Gene System Driven by Single Target MDR 1 Promoter

doi：

摘要：

目的 通過構建以MDR1啟動子為啟動序列的雙熒光素酶報告基因系統并進行活性分析,為MDR1基因表達的單靶點調控研究和逆轉劑的篩選提供一種有效的方法.方法 從HCT-8細胞中提取DNA并克隆含有MDR1基因啟動子中Y-box序列.將該序列重組到螢光素酶報告基因載體pGL-3-Basic的啟動區域中,從而構建報告基因載體pGL-MDR1.將pGL-MDR1和pRL-TK載體共轉染到HCT-8和HCT-8/VCR細胞中.通過調節不同載體的比例來優化轉染效率.利用MDR1基因激活劑(熱誘導)和抑制劑(EGCG)等處理來分析其啟動轉錄活性受外界因素的影響.結果 通過直接測序法驗證了pGL-MDR1含有MDR1基因啟動子Y-box序列且沒有出現堿基突變.在pGL-MDR1和pRL-TK的轉染比例為5:5時,轉染效率最高并具有最高的螢光素酶活性.通過MDR1基因激活處理后表現為時間依賴性地激活MDR1基因的表達,而MDR1基因抑制劑的作用則相反.結論 MDR1啟動子為啟動序列的雙熒光素酶報告基因系統建立成功.該系統不但可以用于研究活體生物發光成像和MDR1基因表達的機理,而且可用于單靶點的多藥耐藥抑制劑的篩選.

作者：	李長龍薩曉嬰
Author：	LI Chang-long  SA Xiao-ying
作者單位：	浙江省醫學科學院,浙江省實驗動物中心,浙江省實驗動物與安全性研究重點實驗室,杭州,310013
期 刊：	中國比較醫學雜志   ISTIC
Journal：	CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
年，卷(期)：	2008, 18(9)
分類號：	R349
關鍵詞：	MDR1    啟動子    熒光索酶報告基因    活性鑒定
機標分類號：	R73 R39
機標關鍵詞：	熒光素酶報告基因    單靶點    雙熒光素酶    基因啟動子    抑制劑    轉染效率    基因載體    螢光素酶    基因系統    基因激活    基因表達    生物發光成像    直接測序法    時間依賴性    轉錄活性    效率最高    細胞    系統建立    外界因素    篩選
基金項目：	浙江省科技廳實驗動物公共服務平臺項目