小鼠CYP2E1基因靶向miRNA表達載體的構建及鑒定

Construction and Identification of miRNA Expression Vector Targeting on Mouse CYP2E1

doi：

摘要：

目的 設計并構建靶向小鼠CYP2E1基因的miRNA干擾質粒,為探索CYP2E1基因功能奠定基礎.方法 應用invitrogen設計軟件設計兩條干擾小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA序列,合成相應的回文DNA序列,退火后分別連接到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR載體上,構建兩套miRNA真核表達載體CYP2E1-miR1和CYP2E1-miR2,并使用該載體特有的串聯方法將兩載體上的miRNA前體寡核苷酸序列進行串聯成為CYP2E1-miR1-miR2;將上述重組載體分別與構建的pcDNA3.1(+)-CYP2E1表達質粒共轉染入293T細胞,RT-PCR法鑒定其干擾效果.結果 經酶切及測序鑒定,針對鼠CYP2E1基因的miRNA干擾質粒構建成功,并能夠有效抑制共轉染入293T細胞的pcDNA3.1(+)-CYP2E1質粒的表達,且串聯質粒CYP2E1-miR1-miR2優于單獨的干擾質粒CYP2E1-miR1及CYP2E1-miR2.結論 小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA表達載體構建成功.

作者：	張偉李小穎張連峰
Author：	ZHANG Wei  LI Xiao-ying  ZHANG Lian-feng
作者單位：	中國醫學科學院實驗動物研究所,北京協和醫學院比較醫學中心,衛生部人類疾病比較醫學重點實驗室,北京,100021
期 刊：	中國比較醫學雜志   ISTIC
Journal：	CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
年，卷(期)：	2009, 19(6)
分類號：	R349
關鍵詞：	CYP2E1    微小RNA    RNA干擾
機標分類號：	R73 R69
機標關鍵詞：	小鼠    CYP2E1    基因靶向    miRNA表達    真核表達載體    質粒構建    測序鑒定    Expression Vector    干擾質粒    pcDNA3.1    293T細胞    寡核苷酸序列    軟件設計    共轉染    串聯    miRNA前體    重組載體    載體構建    基因功能    干擾效果
基金項目：	實驗動物和人類疾病動物模型資源擴展計劃