学术论文

      整合子与不同来源沙门菌株耐药性的相关性研究

      目的:通过比较不同来源沙门菌株的耐药性差异、耐药酶携带情况、Ⅰ类整合子携带率和整合子上耐药基因携带情况,分析其相互之间的关系,探讨整合子在细菌耐药性的获得和传递中的作用,为预防和控制食源性疾病,指导临床合理用药,制定干预细菌多重耐药性的产生及播散措施提供一定的理论依据和实验基础。<br>   方法:<br>   1.沙门菌株的收集与鉴定<br>   共收集了133株不同来源的沙门菌:健康从业人员肠道内分离菌株(健康携带株)111株:其中2005年为45株,2007年为66株;食品中毒标本中分离菌株(食品株)8株;临床标本分离菌株(感染株)14株。对收集到的菌株...
      目的:通过比较不同来源沙门菌株的耐药性差异、耐药酶携带情况、Ⅰ类整合子携带率和整合子上耐药基因携带情况,分析其相互之间的关系,探讨整合子在细菌耐药性的获得和传递中的作用,为预防和控制食源性疾病,指导临床合理用药,制定干预细菌多重耐药性的产生及播散措施提供一定的理论依据和实验基础。
         方法:
         1.沙门菌株的收集与鉴定
         共收集了133株不同来源的沙门菌:健康从业人员肠道内分离菌株(健康携带株)111株:其中2005年为45株,2007年为66株;食品中毒标本中分离菌株(食品株)8株;临床标本分离菌株(感染株)14株。对收集到的菌株首先依据通用规范(GB/T4789.4-2003),用沙门菌属诊断血清进行血清学实验鉴定,再使用肠杆菌鉴定系统API20E进行复核鉴定,确保全部菌株均为沙门菌。
         2.不同来源的沙门菌株的耐药性及耐药酶的检测
         对收集的菌株采用Kerby-Bauer纸片扩散法进行了6大类共15种抗菌药物的敏感性测定;对耐3代头孢菌素的菌株,采用双纸片协同试验检测了ESBLs携带情况,采用抗菌药物及抑制剂组合耐药表型筛选法检测了AmpC酶的携带情况。
         3.不同来源的沙门菌株的Ⅰ类整合子检测
         采用PCR方法,对收集的菌株进行了Ⅰ类整合子筛选。在确认了Ⅰ类整合子阳性菌株的基础上,对其整合的耐药基因盒进行扩增,扩增产物纯化后进行测序,序列分析后对耐药基因盒的种类及其结构进行分析。
         结果:
         1.标本的生物学特性:133株实验菌株的氧化酶均为阴性;A-F多价O抗原血清凝集全部为阳性;血清分型共得到36个血清型,其中占前6位的为:德尔卑沙门菌、山夫登堡沙门菌、猪霍乱沙门菌、阿哥纳沙门菌、明斯特沙门菌和鼠伤寒沙门菌,分别占14.3%、12.0%、10.5%、9.8%、6.0%和3.8%。菌株的API编码以6704752和6704552为主,分别占47.4%和36.1%。
         2.药物敏感试验结果:健康携带株、食品株和感染株对两种或两种以上抗菌药物的耐药率分别为9.91%、12.50%和57.14%,对单一抗菌药物以链霉素耐药率最高,而对头孢菌素类药物较为敏感。
         2.1111株健康携带株对两种或两种以上抗菌药物的耐药率2007年高于2005年,分别为12.12%和6.67%。健康携带株对四环素与链霉素耐药率最高,均为13.51%,但对链霉素耐药中介率高达65.77%。
         2.28株食品株对萘啶酸耐药率最高,为37.5%,其次对四环素的耐药率为25%,对链霉素中介率达37.5%。
         2.314株感染株对各种抗菌药物耐药率由高到低的顺序为:萘啶酸(66.67%),链霉素(46.67%),四环素(40%),氨苄西林与甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲基异恶唑(33.33%),头孢噻呋与氯霉素(26.67%),头孢噻吩、头孢曲松钠、庆大霉素、卡那霉素为(13.33%)。可见感染株耐药性较肠道株与食品株明显增强。所有菌株对头孢西丁的耐药率为0;耐3代头孢菌素的菌株对碳青酶烯类抗菌药物亚胺培南(IPM)的耐药率均为0。
         3.超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与AmpC酶的检测结果:健康携带株、食品株和感染株的超广谱β-内酰胺酶携带率分别为0、12.5%和7.1%; AmpC的携带率均为0。
         4.整合子检测结果:健康携带株、食品株和感染株的整合子携带率为9.91%、12.50%和71.43%。整合子阳性菌株耐药基因盒阳性率分别为5.41%、0和50%;基因盒的种类分别是编码耐磺胺类药物甲氧氨苄嘧啶的基因盒dfrA15、dhfrⅫ、编码耐氨基糖苷类抗菌药物四环素的基因盒aadA1、耐链霉素-壮观霉素的基因盒aadA2和一个功能未知的基因盒orfF。
         4.1111株健康携带株中有11株为Ⅰ类整合子阳性,携带率为9.91%,其中6株细菌整合子携带有耐药基因盒,除第13号多耐株携带3种耐药基因盒:orfF、aadA2、dhfrⅫ外,其余5株仅检出一个基因盒aadA2。Ⅰ类整合子阳性率2007年(23.08%)高于2005年(6.67%)。
         4.2食品株中的多耐株:耐13种抗菌药物的114号菌只检测出Ⅰ类整合子但未检测出耐药基因盒。
         4.314株感染株中10株为Ⅰ类整合子阳性株,其中7株携带耐药基因盒,耐药基因盒种类有5种:aadA1、aadA2、dhfrⅫ、dfrA15和orfF。感染株中耐3或3种以上抗菌药物的8株中有5株为Ⅰ类整合子阳性株,占62.5%。整合子阳性率和耐药基因盒的种类都较健康携带株与食品株更高、更复杂。
         结论:
         1.临床感染株的耐药性及整合子阳性率均高于食品株和健康携带株;2007年分离的健康携带株耐药性与整合子阳性率均高于2005年。表明沙门菌的耐药性在逐年增加,提示了监测细菌耐药性的迫切性,以及合理应用抗菌药物的必要性。
         2.三种来源的沙门菌株的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)携带率也是临床感染株与食品株高于健康携带株,与耐药性一致,表明细菌耐药性的产生与其所处环境中的抗菌药物压力相关。
         3.全部菌株对亚胺培南敏感,AmpC酶携带率为零。提示耐三代头孢菌素的沙门菌感染可选用加酶抑制剂的三代头孢菌素和亚胺培南进行治疗。
         4.感染株整合子阳性率和耐药基因盒的种类都较健康携带株与食品株更高、更复杂,这与细菌的耐药性、耐药酶检测结果一致,证明了整合子捕获耐药基因盒与抗菌药物的选择压力有关,整合子介导了细菌耐药的水平传播,在细菌耐药性的产生中具有重要作用。筛查细菌整合子的携带情况,能快速获得细菌多重耐药的信息,为沙门菌病的预防和治疗提供理论基础。
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      作者: 赵红丽
      学科专业: 临床检验诊断学
      授予学位: 硕士
      学位授予单位: 河北医科大学
      导师姓名: 赵建宏
      学位年度: 2009
      语 种: chi
      分类号: R378.22
      在线出版日期: 2010年5月31日